現代液相(xiang)色(se)譜(pu)分析中，色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)選(xuan)擇(ze)直接影響了分離效果的(de)好壞，選(xuan)擇(ze)合適的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)可以縮短(duan)方法(fa)開(kai)發所需的(de)時間，并且使(shi)方法(fa)更(geng)具穩定(ding)性。

這里為大家提(ti)供一個液相(xiang)色譜柱選擇的簡單思路：

1.確定分(fen)(fen)離(li)目的確定你的應用是否要(yao)求高分(fen)(fen)離(li)度(du)、短分(fen)(fen)析(xi)時間、高靈(ling)敏度(du)、長柱壽命，低(di)的實(shi)驗成本等。

2.評(ping)估分析物的化(hua)學(xue)性(xing)(xing)質(zhi)評(ping)估分析物的化(hua)學(xue)性(xing)(xing)質(zhi)諸如(ru)化(hua)學(xue)結(jie)構、溶解(jie)性(xing)(xing)、穩(wen)定性(xing)(xing)等。

3.選擇合適(shi)的色(se)譜柱了(le)解色(se)譜填(tian)料的物理和化學性(xing)質。

想要選適(shi)合(he)的液(ye)相色譜柱，你需(xu)要先詳(xiang)細了解它。這樣(yang)才能少走冤枉(wang)路！

液相色譜柱的參數——物理性質

柱長，內徑，如250*4.6mm。

長度的選擇：柱越長，總柱效越高（n值越大），柱越長，分析時間也越長。250—300mm是普遍的柱長，實驗室一半以上的工作都是采用此規格柱子，一般用來分離l0到50個組份的中等至復雜混合物；500—600mm，要求較高分辨率的應用，—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質的復雜樣品程序升溫分析。

內徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內徑越小柱效越高，但內徑越大，柱容量也增加，允許進樣量就越多。當進樣量超過柱容量時，則因柱內每塊理論板內不能建立真正的平衡，將會導致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現性不好。因此對于復雜樣品需要準確分離，應使用小內徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就應使用內徑大的柱子，目前實驗室使用常見的柱子內徑一般是4.6mm。

一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長色譜柱使用壽命等。

粒徑(jing)，影響色譜分離度(du)。

粒徑(jing)越(yue)小(xiao)柱效越(yue)高、分(fen)離度越(yue)高，但同時會(hui)導致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的(de)填料(liao)(liao)以(yi)解(jie)決一些(xie)復雜(za)樣品，UPLC可以(yi)使用1.5μm的(de)填料(liao)(liao)；另外10μm或更大粒徑(jing)的(de)填料(liao)(liao)用作半制備或制備柱。

孔徑和比表面積

孔徑(jing)，60A，120A，300A等。孔徑(jing)小，則(ze)含孔率高(gao)，比表(biao)面積大，載碳(tan)量高(gao)；色譜柱填料孔徑(jing)大小需和分子(zi)大小相(xiang)匹(pi)配(pei)，保證分子(zi)自由進出填料孔并與孔內表(biao)面的鍵合(he)相(xiang)進行分離分配(pei)，通常要求孔徑(jing)直徑(jing)是分子(zi)直徑(jing)的3倍(bei)以上(shang)，一(yi)般小分子(zi)使用80—120A，大分子(zi)使用300A。

比(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積(ji)(ji)，指的是每克填(tian)料的表(biao)(biao)面(mian)(mian)積(ji)(ji)，如(ru)180m2/g—350m2/g，與粒度和含孔(kong)率有(you)關；比(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積(ji)(ji)大(da)，會增(zeng)加(jia)樣品(pin)與鍵合(he)(he)相之間(jian)的反應，增(zeng)加(jia)保留和分(fen)離度；比(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積(ji)(ji)小則可以縮短分(fen)析時間(jian)和平衡時間(jian)，并不是比(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積(ji)(ji)大(da)或者小就更(geng)好，需要選擇合(he)(he)適的比(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積(ji)(ji)。

孔容和機(ji)械強(qiang)度

孔(kong)(kong)(kong)容，又稱“孔(kong)(kong)(kong)體積”。指單位顆(ke)粒的空隙(xi)體積大(da)(da)小(xiao)(xiao)。它能很好(hao)的反應填(tian)(tian)料的機械強度(du)。孔(kong)(kong)(kong)體積大(da)(da)的填(tian)(tian)料相(xiang)對孔(kong)(kong)(kong)體積小(xiao)(xiao)的填(tian)(tian)料機械強度(du)要略弱。孔(kong)(kong)(kong)體積為1.5mL/g或更小(xiao)(xiao)的填(tian)(tian)料大(da)(da)多用于(yu)HPLC分離，而孔(kong)(kong)(kong)體積大(da)(da)于(yu)1.5mL/g的填(tian)(tian)料使用于(yu)尺(chi)寸(cun)排阻色譜(pu)和低壓色譜(pu)。

液相(xiang)色譜柱(zhu)的參(can)數--化(hua)學性質

填料(liao)基質

硅膠基(ji)質：純度高本錢低，強度大(da)，化學修飾(shi)輕易，但pH值范圍(wei)有限。大(da)多硅膠基(ji)質填料(liao)在pH2-8之間(jian)穩(wen)定，但經過特殊修飾(shi)的硅膠鍵合(he)相可以穩(wen)定在pH1.5-10。

聚合物基質(zhi)：應(ying)用pH值范圍寬，溫度(du)穩定(ding)（高溫可以(yi)達到80度(du)以(yi)上），機械強度(du)小。

含碳量

含碳量(liang)(liang)(liang)指的(de)是硅膠表(biao)面鍵合相的(de)比例，與比表(biao)面積和鍵合覆蓋度(du)等(deng)有關。高含碳量(liang)(liang)(liang)進步柱(zhu)容量(liang)(liang)(liang)、分辨(bian)率及分析時間，用(yong)于(yu)要求高分離度(du)的(de)復雜樣品(pin)；低含碳量(liang)(liang)(liang)分析時間短、展現不同的(de)選擇性，用(yong)于(yu)快(kuai)速分析簡(jian)單樣品(pin)及需要高含水活動相條(tiao)件(jian)的(de)樣品(pin)。一般C18的(de)含碳量(liang)(liang)(liang)在(zai)7-19%不等(deng)。

鍵合相(xiang)

鍵合(he)試劑不(bu)同(tong)，對化合(he)物的選擇性不(bu)同(tong)，一(yi)般(ban)長(chang)鏈(lian)的烷基鍵合(he)相（C18 C8）比短鏈(lian)的（C4 C3）穩定(ding)；非極(ji)性的鍵合(he)相比極(ji)性的鍵合(he)相（-NH2）穩定(ding)。

封端

封端能夠降低極性堿性化合(he)(he)物由于與(yu)裸露的(de)硅醇基相(xiang)互作用而產(chan)(chan)生(sheng)的(de)拖(tuo)尾峰。不封端鍵合(he)(he)相(xiang)相(xiang)對封端鍵合(he)(he)相(xiang)會產(chan)(chan)生(sheng)不同的(de)選(xuan)擇性，尤其是極性樣品。

正相—反相色(se)譜對比

液相色譜柱有正(zheng)相和反(fan)相之(zhi)分。目前市場上(shang)主(zhu)要以反(fan)相色譜為主(zhu)，約占(zhan)80%的比(bi)例(li)。

現在市面上(shang)的(de)(de)液相(xiang)色(se)(se)譜(pu)柱琳瑯滿目(mu)，了解色(se)(se)譜(pu)柱的(de)(de)參(can)數可以(yi)讓我們有(you)(you)一(yi)個(ge)初步的(de)(de)選擇，但由(you)于各(ge)個(ge)儀器(qi)廠商的(de)(de)填料技術和(he)鍵合(he)技術仍(reng)有(you)(you)差異(yi)，即使(shi)都是(shi)C18柱，同(tong)一(yi)品(pin)牌不同(tong)系列都有(you)(you)不同(tong)的(de)(de)功能(neng)，有(you)(you)能(neng)耐受低pH值的(de)(de)、有(you)(you)耐高溫的(de)(de)、有(you)(you)適合(he)堿性樣品(pin)的(de)(de)等等。所(suo)以(yi)在選擇色(se)(se)譜(pu)柱前要好(hao)好(hao)研(yan)究色(se)(se)譜(pu)柱參(can)數，仔細閱(yue)讀色(se)(se)譜(pu)柱說明(ming)書，才能(neng)找(zhao)到(dao)合(he)適的(de)(de)色(se)(se)譜(pu)柱和(he)適宜的(de)(de)分離方法。